【摘要】目的：探讨环氧合酶2（cyclooxygenase2，COX2）在大鼠非酒精性脂肪肝（NonalcoholicFattyLiverDisease，NAFLD）中的表达及意义.方法:建立大鼠NAFLD动物模型，用免疫组化，RTPCR，Westernblot检测COX2在NAFLD中的表达.结果:光镜下模型组肝损伤明显，治疗组较轻.模型组血清白细胞介素1（IL1）及肝组织血栓素B2（TB2）比正常组明显升高（P<0.05），与模型组相比，治疗组大鼠血清IL1及肝组织TXB2明显降低（P<0.05）；肝组织6KetoprostaglandinF1alpha（6kPGF1α）模型组较对照组低（P<0.05），治疗组较模型组升高；正常组大鼠肝细胞中COX2mRNA几乎无表达，模型组表达阳性，与正常组比较明显升高（P<0.05）；模型组COX2蛋白含量较正常大鼠增高（P<0.05）；经Celecoxib治疗后，同8，12wk组比COX2的表达减弱（P<0.05）.结论：COX2介导的酶活性增加，启动脂质过氧化反应，促进脂肪肝的形成和发展；应用特异性COX2抑制剂，下调COX2的表达，阻断氧应激，可减轻NAFLD的肝损害.【关键词】非酒精性脂肪肝前列腺素内过氧化物合酶白细胞介素16酮前列腺素F1α血栓烷B2大鼠　　0引言　　celecoxib是特异性的环氧合酶2（COX2）抑制剂，对COX2的选择性抑制强度是对COX1抑制作用的375倍［1］.本实验通过建立大鼠非酒精性脂肪肝（NAFLD）动物模型，研究COX2在非酒精性脂肪肝损伤中的作用，以便进一步探讨其在NAFLD中的致病机制.　　1材料和方法　　1.1材料TRIZoL试剂盒（Invitrogen公司），MMLV第一链cDNA合成试剂盒（Invitrogen公司），TaqDNA聚合酶（华美公司），RT及荧光定量PCR试剂盒（RTPCRKit，大连宝生物工程有限公司），内参照GAPDH和βactin（博奥森），Celecoxib（美国Searle公司，进口注册号H20050351）；兔抗鼠COX2多克隆抗体，浓度1∶100（Santa公司）；山羊抗兔多聚体，SABC试剂盒及COX2免疫组化染色试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）.TCl50基因PCR扩增仪（美国MJResearch）.　　1.2方法　　1.2.1动物模型制备及分组成年雄性SD大鼠40只，随机分为正常对照组（n=8）和非酒精性脂肪肝模型组（n=32）［2］.非酒精脂肪肝模型组又随机分为4（n=8），8（n=8），12wk组（n=16）.12wk组又随机取8只于处死前最后14d用灌胃法给予Celecoxib10mg/kg（Celecoxib组）.所有动物均给以普通饲料、自由饮水.非酒精性脂肪肝模型组每天ig含20g/L乳清酸、40g/L胆固醇、80g/L猪油、4g/L蛋黄粉的脂肪乳剂，每次1mL（100g），早上用脂肪乳剂，晚上用生理盐水灌胃.　　1.2.2血清及肝组织标本制备经耳缘静脉注射30g/L戊巴必妥钠溶液麻醉大鼠，经腹主动脉取血4～6mL，分离血清保存在-70℃冰箱中待测血清丙氨酸氨基转移酶（alanineaminotransferase,ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartateaminotransferase,AST）及IL-1含量.处死大鼠后，将肝脏完整的分离出体外，取肝右叶约100mg，用生理盐水溶液制成40g/L的组织匀浆液后，离心后取上清液，-70℃冰箱内保存待测6kPGF1α和TXB2的含量.再取肝脏右叶组织多聚甲醛中固定，石蜡包埋切片，作HE染色和免疫组化.　　1.2.3免疫组化检测COX2应用MPIAS多媒体彩色病理图纹分析系统分析COX2相对积分光密度值，每组每张切片随机选取5个视野，像素点0.389μｍ，在9.306×104μｍ测量窗下测量并记录COX2相对积分光密度值.共2页:1[2]