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补阳还五汤药浴对大鼠周围神经损伤再生影响的实验研究

更新时间:2011-01-12 14:32:35

【摘要】  目的研究补阳还五汤药浴对周围神经损伤后修复的作用。方法采用雌性Wistar大鼠90只,A组为补阳还五汤药浴组,B组为补阳还五汤口服组,C组为单纯端端缝合组,每组30只。造模采用大鼠坐骨神经横断损伤模型,造模成功后7d起,A组大鼠放入补阳还五汤温热药液中游泳,隔日1次,5min/次;B组用补阳还五汤制剂灌胃,隔日1次,3ml/次;C组大鼠进行单纯端端缝合。3组均于术后6周取材进行电生理学、组织形态学观察。结果补阳还五汤药浴可以明显减少神经损伤后运动神经元和感觉神经元的死亡,防止支配肌肉的萎缩变性,促进损伤后功能的恢复。结论补阳还五汤药浴可以在神经元、损伤局部、终末效应器多个平面、多个角度对神经修复产生积极作用。

【关键词】周围神经;损伤与再生;补阳还五汤;药浴

  Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofBuyangHuanwuDecoctionmedicatedbathonneurogenesisaftertheperipheralnerveinjury.Methods90wistarratswererandomlydividedinto3groups,groupAwasBuyangHuanwuDecoctionmedicatedbath,groupBwasBuyangHuanwuDecoctionadministration,groupCsimplyhadanend-to-endsuturedoperationserveascontrol.Themodelofischiadicnervetranssectionwereadopted.After7days,wistarratsofgroupAswaminthewarmBuyangHuanwuDecoctionphysicliquor,5minutesatimeeveryotherday.TheintragastricadministrationwasgiveningroupB3mlatimeeveryotherday.GroupCsimplyhadanend-to-endsuturedoperation.Electrophysiologyandhistomorphologyweredetectedafter6weeks.ResultsTheBuyangHuanwuDecoctionmedicatedbathcouldobviouslyreducethedeathnumberofmotorneuronsandsensoryneuronsafternerveinjury,preventtheatrophyanddegenerationofgastrocnemiusmuscleandpromotethefunctionalrecoveryafterinjury.ConclusionTheBuyangHuanwuDecoctionmedicatedbathmayplayanactiveroleinthenerverepairofneuron,damageregionandendingeffectiveapparatusfrommultiplefacts.

  Keywords:Peripheralnerve;Injuryandrestore;BuyangHuanwuDecoction;Medicatedbath

周围神经损伤属于细胞损伤的范畴[1],其再生的基础和临床研究虽取得了长足的进步,但目前周围神经损伤修复后功能恢复仍欠理想。究其原因,对于每一条神经纤维来说,神经元、神经干中的支持细胞及其终末器官是互相营养的。周围神经干损伤后,其上位神经元、整个神经干及终末器官均会发生变性甚至坏死。所以,周围神经损伤的修复也是一个综合的修复过程。近年来,中医中药以其多靶点、多途径的综合疗效优势[2]愈来愈受到人们的重视。神经损伤属于中医的“痿证”,表现为肢体功能障碍,肌肉萎缩,感觉消失,治疗上应补气活血通络,补阳还五汤在临床治疗和我们的前期研究中有良好的作用。因此,我们设计了动物实验来进一步研究补阳还五汤药浴及口服对周围神经再生的影响。

  1材料与方法

  1.1材料

  实验于2006-03-07在黑龙江中医药大学实验中心完成。雌性Wistar大鼠,90只,体重220~250g,购自黑龙江中医药大学动物实验中心。中药煎剂:生黄芪120g,当归尾6g,赤芍6g,川芎3g,红花3g,地龙3g,桃仁3g。方药组成采用补阳还五汤原方,5倍剂量为1剂。混合均匀,煎煮前预先用清水浸泡20min,加水量约5000ml,煮沸后文火再煎约20min,煎得剂量约3000~3500ml,自然冷却至微温,进行灌胃或药浴。中药材及煎制均由黑龙江中医药大学附属第一医院煎药室提供。

  1.2方法

  按手术先后顺序随机分成A、B、C3组,A组为补阳还五汤药浴组,B组为补阳还五汤口服组。C组为单纯端端缝合组,每组30只。造模采用大鼠坐骨神经横断损伤模型:右坐骨神经于坐骨结节下0.5cm水平横行切断,用9/0无创尼龙缝合线均匀缝合神经外膜3针。造模成功后7d起,A组大鼠放入补阳还五汤温热药液中游泳,隔日1次,5min/次;B组用补阳还五汤制剂灌胃,隔日1次,3ml/次;C组大鼠进行单纯端端缝合。3组均于术后6周取材进行电生理学、组织形态学观察。

  1.2.1坐骨神经功能指数(SFI)测定

  自制大鼠行走箱。术后3周起,隔日进行SFI测定。碳素墨水刷染大鼠双后足,放在底面铺设白纸的行走箱通道上行走,可清晰记录大鼠行走过程中双侧后足足印7~8个,选取质量较好的正常侧足和实验侧足测定各变量,将数值代入Bain公式[3]计算SFI。

  1.2.2神经传导速度(NCV)测定

  术后6周各组随机取15只大鼠,1%戊巴比妥钠腹腔麻醉,切取术侧坐骨神经全长,采用Pclab生物信号采集处理系统(黑龙江中医药大学生理教研室提供)记录诱发电位并计算出坐骨神经传导速度(NCV)。

  1.2.3组织形态学观察L4,L5段脊髓及背根神经节术后6周各组取15只大鼠,麻醉后经左心室向升主动脉插管后,灌入洗涤液(生理盐水200ml,肝素钠4mg,盐酸普鲁卡因1.0g)后,4%多聚甲醛300ml心脏灌注固定,取脊髓L4~L5段和双侧L4,L5脊神经节置于4%多聚甲醛液中固定2d后,进行常规石蜡包埋,连续切片,片厚6μm。石蜡切片脱蜡,切片入1%焦油紫染液,37℃温箱中浸染1h后,蒸馏水速洗,95%乙醇迅速分化,镜检尼氏体呈紫色,其他组织几乎无色,无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。应用美国Image-proplus专业图像分析系统进行观察,每张切片随机抽取5个同倍率视野,进行图像分析。  神经损伤局部:实验侧坐骨神经测定NCV后,距吻合口近远端各0.5cm处横行切断坐骨神经,常规HE染色,并应用美国Image-proplus专业图像分析系统进行观察及分析。  失神经支配腓肠肌:各组大鼠麻醉状态下取大鼠双侧腓肠肌,称湿重后取中份肌组织作常规HE染色,切片同样应用图像分析系统进行观察及分析。

  1.2.4主要观察指标SFI,NCV及组织形态学观察。

  1.2.5统计学分析数据采用±s表示,数据统计分析均在SPSS11.0软件中进行,采用方差分析,多组间两两比较用LSD法。

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