【摘要】目的：探讨新合成的拟载脂蛋白E（apoE）对蛛网膜下腔出血（SAH）的治疗作用及机制.方法：55只C57BL6/JL小鼠随机分为：假手术组，SAH组，低剂量（SAH＋apoE1410，0.6mg/Kg）组和高剂量（SAH＋apoE1410，1.2mg/Kg）组.显微操作戳破右侧大脑中动脉（MCA）和大脑前动脉（ACA）分叉处造成SAH模型.术后30min开始经尾静脉给药，每12h一次，连用3d.每日检测小鼠的一般精神状态、神经功能评分、综合运动能力评分.术后第3日测量MCA直径.结果：术后SAH组小鼠精神萎靡，食欲下降，有的难进食水，体质量下降，死亡率为42.8％.高、低剂量组与SAH组比较，一般症状明显减轻，死亡率分别为14.2％和18.8％，与SAH组比较，显著降低（P<0.05）.MCA直径在假手术组为（111.3±7.4）μm，与SAH组（55.2±17.8）μm比较，平均缩小了59%（P<0.05）；低、高剂量组MCA分别为（91.4±16.4）μm和（83.5±13.6）μm，与SAH组（55.2±17.8）μm比较，MCA痉挛程度下降（P<0.05）.神经功能评分在SAH组（6.7±1.8）明显低于假手术组（21.0±0.0,P<0.05）；高剂量组（10.6±4.8）、低剂量组（10.9±2.6）的神经功能评分分别明显高于单纯SAH组（6.7±1.8,P<0.05）；但在两个剂量组间未见差别（P>0.05）.综合运动能力评分在SAH组（58.8±25.7）明显低于假手术组（272.2±25.7,P<0.05）；高剂量组（95.5±13.2）,低剂量组（95.6±18.5）的综合运动能力分别明显高于单纯SAH组（58.8±20.9,P<0.05）.结论：外源性拟apoE对SAH及脑血管痉挛有一定的治疗作用，其机制与降低神经系统对损伤的炎性反应有关，拟apoE有可能成为治疗SAH的新措施.

【关键词】蛛网膜下腔出血；拟apoE；apoE基因；脑血管痉挛

　　载脂蛋白E（apoliopoproteinE，apoE）在中枢神经系统的生理、病理作用越来越受到重视.完整的apoE分子量大，正常状态下不能通过血脑屏障，限制了其作为外源性药物的治疗性应用［1］.内源性apoE或脑室内注射apoE全蛋白通过下调中枢神经系统炎症反应、减轻氧化应激、抗兴奋性氨基酸毒性、直接增加神经营养等作用发挥神经保护作用［2］拟apoE（133149）是体外重组来自apoE受体结合区的一个17肽，外源性给药能透过血脑屏障，同时保留了apoE全蛋白的许多特性［3-4］.但有关体外重组apoE片断用于SAH的治疗性研究，目前国内外还少见报道.蛛网膜下腔出血（subarachnoidhemorrhage,SAH）患者脑脊液apoE水平下降，提示apoE与SAH的病理机制有关［5-6］.本研究采用静脉给药，旨在探讨拟apoE1410对实验性SAH及脑血管痉挛是否具有治疗作用.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　拟apoE1410的合成：拟apoE1410，cetylASAibLRKLAibKRLLamide，12肽，分子量：1410D.由北卡罗来纳州立大学肽合成实验室合成.Leica手术显微镜（德国Leica公司）；显微手术用器械，包括弯头手术镊，手术剪刀，阻血夹及其持器等（瑞士）.小动物呼吸机，麻醉机，血气分析仪（美国Harvard公司）；转棒仪（意大利UgoBasile公司）；图像采集及图像分析系统（加拿大图像研究公司，型号MCIDM5）；脑血管灌注装置，灌注胶（杜克大学多学科神经保护实验室）.

　　1.2方法　　1.2.1动物分组及SAH模型制备

　　C57BL6/JL雄性小鼠55只，12～14wk.随机分为4组：假手术组（4只）；SAH（SAH盐水）组（21只）；低剂量（SAH＋apoE1410，0.6mg/kg）组（14只）和高剂量（SAH＋apoE1410，1.2mg/kg）组（16只）.将小鼠气管插管，连接呼吸机，监测血压、血气和体温，控制在生理状态，显微手术戳破大脑中动脉（middlecerebralartery，MCA）和大脑前动脉（anteriorcerebralartery，ACA）分叉处造成SAH模型.拟apoE1410溶于PBS，经尾静脉注射，SAH术后30min开始第一次，每12h一次，共用3d，其它两组只注射生理盐水.

　　1.2.2神经功能检测评分

　　参考文献［7］的方法进行.神经行为学主要检测动物的面、颈部触觉，足掌痛觉，自由活动，双前肢对称性，攀爬能力，平衡运动能力等.检测总分为3～21分.其中运动功能检测0～12分，感觉功能检测3～9分.

　　1.2.3转棒实验应用

　　转棒仪检测小鼠左右肢体的协调能力、平衡能力、体力与耐力等综合运动能力.该仪器由一根直径为3cm的转棒和齿轮传送系统以及数显系统构成，在电力推动下进行加速度转动，最高转数为300转/分.在手术前一天上午（分组之前），对所有小鼠进行训练.将小鼠放置在静止的转棒上，开动机器，开始加速度转动，小鼠可能会掉落，重新放回转棒，共重新放回转棒3次.休息10min之后，进行第2次训练，同样的训练共进行3次.获取基数值：在上午接受3次训练之后，下午取每1只鼠的基数值.在转棒静止状态，将小鼠轻轻放在转棒上，开动机器，开始加速度转动，记录小鼠掉落的时间，或者记录当小鼠四肢抱住转棒，不能走动达到2圈，即360度时的时间，单位为秒（s），共测定3次，每次之间至少间隔10min，取其均值为手术前的基数.训练的目的是让所有实验组的小鼠均接受同样的学习训练，每只鼠的基数虽有微小差别，但可以视为相同.术后第2日开始，每日进行1次，共3d.具体做法与取得基数时一致.

　　1.2.4脑血管铸型及脑血管直径的测量

　　术后72h行脑血管灌注，测量伤侧MCA距与ACA分叉处1.00mm处的直径.

　　1.2.5出血等级的判定

　　参考文献［7］的方法进行.SAH术后72h，判定出血等级.将脑血管铸型的标本放置于生理盐水中，手术显微镜下放大6倍，进行出血等级的判定.以出血块的面积和出血块的密度为依据将出血量分为3个等级.出血块面积在距离MCAACA分叉处<1.0mm为1级；>1.0mm为2级；>1.0mm,同时出血面积超过了ICA为3级.出血密度：透过血块能观察到脑实质为1级；透过血块看不到脑实质为2级；根本无出血块者为0级.综合出血面积和密度，出血等级为2～5级.

　　统计学处理：应用SPSS11.0统计分析软件进行数据分析，数据以x±s表示.转棒实验结果应用重复测量的方差分析，两组间比较用Scheffe检验.MCA和神经行为学检测结果应用KruskalWallis检验.出血等级资料，属非参数统计，用秩和检验.死亡率用χ2检验.P<0.05为差异具有统计学意义.

　　2.1神经功能学评价

　　术后SAH组小鼠的局部感觉障碍，表现为患侧对侧的面部、胡须