2.2LSE对小鼠肝细胞超微结构的影响正常小鼠肝细胞线粒体具完整双层膜结构，嵴的排列整齐有序。CCl4损伤组中肝细胞线粒体发生明显肿胀，外层膜结构不完整，线粒体内嵴变形、断裂、排列紊乱、疏松，严重者嵴完全消失，内室基质颗粒消失，出现空泡变性。而各LSE组小鼠肝细胞线粒体结构均有所改善，尤其是400mg/kgLSE处理组，其线粒体形态和结构基本恢复正常，嵴的排列趋向整齐、有序，与正常组的小鼠肝细胞形态结构无明显差异。结果见图1。

　　图1小鼠肝脏超微结构图（×12000）（略）

　　2.3LSE对小鼠肝脏线粒体膜电位的影响各处理组小鼠肝脏线粒体的膜电位值见图2。正常小鼠的线粒体膜电位值为（-192.0±7.9）mV，CCl4损伤后小鼠肝脏线粒体膜电位值下降为（-163.1±6.1）mV（15.1%，P<0.01）。而预先以各剂量LSE处理的小鼠肝脏线粒体膜电位的值则有所回升。200，400mg/kgLSE组小鼠肝脏线粒体的膜电位值与正常小鼠无差异，即完全对抗了CCl4诱导的线粒体膜电位的降低。

　　与正常组比较，**P<0.01；与CCl4组比较，**P<0.01；n=8

　　图2LSE对小鼠肝脏线粒体膜电位的影响（略）

　　aCa2+诱发线粒体肿胀的量效曲线；b各组小鼠线粒体诱发相同程度肿胀所需Ca2+浓度;与正常组比较，**P＜0.01；与CCl4组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

　　图3LSE对肝脏线粒体在体外对Ca2+诱发肿胀敏感性的影响（略）

　　2.4LSE对小鼠肝脏线粒体肿胀敏感性的影响由图3可知，正常组小鼠肝脏线粒体在50mmol/LCa2+诱发下产生明显肿胀，其吸光度下降值为224.8，小鼠急性肝损伤后，诱发与正常组小鼠线粒体相同程度的肿胀所需Ca2+浓度达310.2mmol/L，为正常组Ca2+浓度的6.2倍（P<0.01），预先给予100，200，400mg/kgLSE灌胃处理的小鼠肝脏线粒体诱发相同程度肿胀所需Ca2+的浓度与损伤组相比有所减少，表明LSE可一定程度抑制损伤引起的肝脏线粒体敏感性下降，表明LSE对CCl4引起的线粒体肿胀有明显的保护作用。

　　3讨论　　CCl4急性肝损伤是筛选护肝药、研究药物作用原理的经典模型。CCl4进入体内后，经肝脏细胞色素P450激活，生成三氯甲基自由基，引发生物膜脂质过氧化，或与膜脂或蛋白质等大分子共价连结，破坏膜结构与功能完整，肝细胞膜的通透性增加，胞浆内的可溶性酶渗出，因而，血清ALT等酶的活性可灵敏反映肝细胞损伤、坏死的程度［10］。　　本研究发现，一定剂量中华补血草根提取物能显著抑制CCl4引起的肝损伤小鼠血清ALT和AST活力的升高，这一结果表明LSE具有保护肝细胞浆膜、对抗肝损伤的作用，同时还提示，LSE对线粒体膜可能具有一定保护作用。因为80%的AST来源于线粒体，一般以ALT活性上升作为肝细胞浆膜损伤的标志，而AST活性升高则作为线粒体损伤的标志［11］。观察小鼠肝细胞的超微结构，发现LSE可明显改善损伤引起的肝细胞线粒体肿胀、外膜结构不完整、嵴变形、断裂、排列紊乱等，进一步提示，LSE的抗肝损伤作用与其对线粒体的保护作用有关。　　越来越多的证据表明，在细胞损伤或坏死过程中，线粒体起着关键作用。许多疾病发生过程中均伴随着线粒体功能的改变，而线粒体功能缺陷可导致人类和动物多种疾病的发生。最新研究已经证实，在肝损伤过程中伴随着线粒体功能的改变，而某些护肝药物可以通过保护肝脏线粒体，从而发挥肝脏保护作用［7，12，13］。因此，本研究以肝脏线粒体为靶点，通过分离肝脏线粒体，以线粒体膜电位及线粒体对钙诱发肿胀的敏感性为指标，考察LSE对肝损伤小鼠肝脏线粒体的影响，以深入探讨LSE的护肝机制。　　检测线粒体膜电位的值发现，CCl4能引起小鼠肝细胞线粒体膜电位一定程度下降，这与前面［7，11］的研究结果相吻合，而一定剂量LSE可完全逆转肝损伤引起的肝脏线粒体膜电位的下降，表明LSE对肝脏线粒体起显著保护作用。　　运用体外高钙诱导线粒体肿胀模型，以诱发线粒体产生肿胀所需Ca2＋的浓度为指标，可比较线粒体的不同活性状态［8，9］。本研究比较正常、肝损伤及预先用LSE灌胃处理的小鼠肝脏线粒体发现，正常小鼠线粒体对高钙敏感，外加50mmol/LCa2＋即产生明显肿胀；而急性损伤小鼠肝脏线粒体需加6.2倍的Ca2＋才能诱发相同程度的肿胀，表明小鼠肝脏线粒体对高钙诱发肿胀的敏感性因肝损伤而有明显下降。预先给予LSE灌胃处理的小鼠肝脏线粒体诱发相同程度肿胀所需要的Ca2＋浓度与肝损伤小鼠相比有不同程度回升，提示LSE可一定程度维持对钙诱发肿胀的敏感性。以上结果进一步证实了LSE对肝细胞的保护作用与其肝脏线粒体保护作用密切相关。　　综上所述，本研究探讨了LSE的护肝作用及机制，发现LSE可显著对抗CCl4诱导的小鼠急性肝损伤，其药理机制可能与其对线粒体的保护作用有关。

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