子宫腺肌病患者雄激素治疗前、后子宫内膜中雌、孕激素受体及表皮生长因子受体的表达

中华妇产科杂志 1999年第4期第34卷 子宫内膜异位症研究

作者：张华　顾美皎　王成鑫　黄宏英

单位：张华，黄宏英（430030 武汉市第四医院妇产科），王成鑫（病理科）；顾美皎（同济医科大学附属同济医院妇产科）

关键词：子宫内膜异位症；腺肌瘤；受体；雌激素；孕激素受体；受体；表皮生长因子-尿抑胃素；雄激素类

　　【摘要】　目的　探讨雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、表皮生长因子受体(EGFR)及生长激素(GH)在子宫腺肌病中的表达及与雄激素治疗疗效的关系。方法　对30例子宫腺肌病患者(组1)及24例合并肌瘤的子宫腺肌病患者（组2）的手术标本，应用免疫组织化学链霉亲合素-生物素化过氧化物酶复合物法测定ER、PR、EGFR及GH;另应用相同方法对24例术前应用甲基睾丸素治疗的子宫腺肌病患者（组3）测定ER、PR，并进行比较。结果　(1)组1的在位内膜与异位内膜ER、PR、EGFR、GH均呈阳性，阳性率比较，差异无显著性（P＞0.05）;但在位内膜ER、PR的强阳性率高于异位内膜，差异有显著性（P＜0.05）。(2)组2的在位内膜与异位内膜ER、PR、EGFR、GH均阳性，阳性率及强阳性率与组1比较差异均无显著性（P＞0.05）。(3)组3的在位内膜与异位内膜ER、PR均阳性，其阳性率及强阳性率与组1、组2比较，差异均无显著性（P＞0.05）。(4)雄激素治疗疗效好的患者在位内膜中PR强阳性率高于疗效差的患者，差异有显著性（P＜0.05）；疗效好的患者异位内膜中ER强阳性率及PR阳性率、强阳性率高于疗效差的患者（P＜0.05，P＜0.01）。结论　子宫腺肌病在位内膜与异位内膜均有ER、PR、EGFR、GH表达，与子宫腺肌病的发生可能有关。

The Expression of the Receptors of Estrogen, Progesterone, Epidermal Growth Factor and Growth Hormone in Uterine Adenomyosis and a Comparative Study after Treatment with Androgen

ZHANG Hua*, GU Meijiao, WANG Chengxin*, et al.

　　*The Fourth Hospital in Wuhan, Wuhan 430030

　　【Abstract】　Objectives　To investigate the pathogenesis of adenomyosis and its immunopathological study after treatment with androgen.Methods　Estrogen receptor (ER), progestoren receptor (PR), epidermal growth factor receptor (EGFR) and growth hormone (GH) were determined by immunohistochemical SABC method in 30 cases of adenomyosis (group Ⅰ) and another 24 cases of adenomyosis accompanying leiomyoma (group Ⅱ); ER, PR were determined with the same methods in 24 cases of adenomyosis who had been treated with methyltestosterone before operation (group Ⅲ).Results　(1) Both the eutopic and ectopic endometrium in group Ⅰ showed ER, PR, EGFR, GH positive. The positive expression rate had no significant differences (P＞0.05). The strong positive rate of ER, PR in the eutopic endometrium were significantly higher than that in the ectopic (P＜0.05). (2) ER, PR, EGFR, GH in the eutopic and ectopic endometrium in group Ⅰ and group Ⅱ all showed positive but no significant differences (P＞0.05). (3) Both ER and PR showed positive in group Ⅰ, Ⅱ and group Ⅲ. There were no significant differences (P＞0.05). (4)Among the 24 cases treated with androgen, the positive and strong positive rate of ER and PR in both eutopic and ectopic endometrium of 11 cases proved effective were higher than that of 13 ineffective cases and there were significant and striking differences (P＜0.05, ＜0.01).Conclusions　ER,PR,EGFR,GH all expressed in the eutopic and ectopic endometrium. They played important roles in promoting the development of adenomyosis.

　　【Key words】　Endometriosis　　Adenomyoma　　 Receptors, estrogen 　　 Receptors, progestogen 　　Receptors, epidermal growth factor-urcgastrone 　　Androgens

　　为了探讨子宫腺肌病的发病机理，本研究采用免疫组织化学(免疫组化)链霉亲合素-生物素化过氧化物酶复合物法SABC法检测雌激素受体(ER)、孕激素受体（PR）、表皮生长因子受体（EGFR）、生长激素（GH）在子宫腺肌病患者子宫内膜中的表达，以指导内分泌治疗的药物选择。

　　资料与方法

　　一、研究对象

　　1.资料来源：自1991年1月至1997年10月，在武汉市第四医院妇科因子宫腺肌病行子宫切除手术的患者78例，为本研究对象，其中术前未用雄激素治疗者54例，54例中单纯子宫腺肌病30例（组1）、合并肌瘤24例（组2）；雄激素治疗24例（组3），为甲基睾丸素10 mg，于月经周期第5天开始，每天1次，共22天，连续3个周期，然后行子宫切除术，其中1例治疗1个周期，2例治疗2个周期。组1年龄中≤40岁12例，＞40、≤50岁14例，＞50岁4例。组2各年龄组分别为8例、11例、5例。组3各年龄组分别为14例、9例、1例。78例患者均未绝经。经统计学处理，各组年龄差异无显著性（P＞0.05）。其中，孕1次2例，≥2次76例; 分娩1次42例，≥2次34例，未分娩2例; 人工流产1次21例，≥2次52例，未行过人工流产5例。

　　2.临床表现与诊断：78例子宫腺肌病患者表现为痛经26例（33.3%）、经量增多12例(15.4%)、经期延长5例（6.4%）、痛经伴月经异常33例(42.3%)、无临床症状2例（2.6%）。妇科检查：子宫稍大22例（28.2%），子宫增大如孕8周22例（28.2%），如孕12周28例（35.9%），大于孕12周6例（7.7%）。B超特征：(1)24例子宫增大，但不超过10 cm×9 cm×8cm。(2)9例子宫形态改变为宫体肥大，饱满圆钝；异位内膜聚集的区域，则表现为突起包块而使子宫凹凸不平，子宫浆膜层不光滑。(3)44例子宫回声强且不均匀，与子宫肌壁间无明显界限。(4)1例宫腔回声前移，为异位内膜侵犯子宫后壁所致。78例中，术前B超诊断为子宫腺肌病54例（69.2%），诊断为子宫肌瘤24例（30.8%）。病理检查：78例手术切除的子宫标本经病理检查确诊为子宫腺肌病。异位内膜细胞呈小岛状或弥漫性分布,少数病例有周期性改变，常见的是非活动性和不成熟性的变化,即纯增生期改变,在远离基底层的异位内膜细胞偶见腺体有分泌性改变和蜕膜样变。其中73例为增生改变，3例为分泌改变，2例兼有增生和分泌改变。

　　3.雄激素治疗疗效判断标准：痛经程度：患者仅感不适仍能坚持工作为(+);需服用止痛药物痛经缓解为(+ +);服止痛药物痛经不能缓解(+ + +)。(1)疗效好：服用雄激素后痛经较原来减轻或完全消失；月经量减少接近原来经量，经期缩短为正常；妇科及B超检查无明显改变。(2)疗效差：服用雄激素治疗后，痛经无缓解；经期及月经量无明显改变；妇科及B超检查无明显改变。

　　二、方法

　　1.取材：将切除的子宫沿纵轴至两侧宫角呈“Y”型切开，可见子宫肌壁增厚或蜂窝状区域，内有咖啡色液体潴留。取材子宫内膜及病灶组织。

　　2.免疫组化SABC法测定：ER、PR、GH单克隆抗体、EGFR多克隆抗体均为即用型。组织石蜡标本切片厚3 μm。按照免疫组化SABC试剂(试剂盒购于武汉博士德生物工程公司)操作常规进行：Ⅰ抗：鼠抗人ER、PR抗体、鼠抗人GH抗体、兔抗人EGFR抗体；Ⅱ抗：生物素标记羊抗鼠、羊抗兔IgG及链霉亲合素-生物素过氧化物酶。脱蜡、系列脱水、3% H2O2灭活内源性酶，加抗原修复液后，再加入0.01%枸橼酸缓冲液，置于微波炉（95℃～98℃）中20分钟进行抗原修复，依次滴加正常小牛血清及Ⅰ、Ⅱ抗和生物素过氧化物酶，二氨基联苯氨（DAB）显色封片镜检。结果判断：以细胞浆着色程度(浅、中、深)及计数100个细胞中的阳性细胞数来判定。阴性(-)：无着色细胞，细胞内无棕黄色颗粒或呈均一性淡棕黄色与背景底色一致；弱阳性（+）：轻度着色及阳性细胞数＜25%；强阳性（+ +）：明显着色及阳性细胞数＞25%。

　　三、统计学方法

　　以χ2检验进行统计学处理。

　　结　果

　　一、子宫腺肌病患者在位、异位内膜中ER、PR、EGFR、GH比较

　　组1中在位内膜ER、PR强阳性率高于异位内膜，差异有显著性 (P＜0.05)。在位内膜与异位内膜EGFR、GH均呈阳性，但阳性率及强阳性率差异均无显著性(P＞0.05)。

　　组2在位内膜与异位内膜ER、PR、EGFR、GH均阳性，其阳性率及强阳性率与组1比较，差异无显著性(P＞0.05)。见表1。

表1　子宫腺肌病患者在位与异位内膜的ER、PR、EGFR、GH比较

组别 总

　　例

　　数 ER PR EGFR GH 阳性 强阳性 阳性 强阳性 阳性 强阳性 阳性 强阳性 例

　　数 百分比

　　(%) 例

　　数 百分比

　　(%) 例

　　数 百分比

　　(%) 例

　　数 百分比

　　(%) 例

　　数 百分比

　　(%) 例

　　数 百分比

　　(%) 例

　　数 百分比

　　(%) 例

　　数 百分比

　　(%) 组1 　在位内膜 30 27

90.0

20 66.7 26 86.7

17 56.7 24 80.0

9 30.0 28 93.3

15 50.0 　异位内膜 30 25 83.3 11 36.7 26 86.7 7 23.3 26 86.7 11 36.7 26 86.7 9 30.0 组2 　在位内膜 24 22 91.7 20 83.3 21 87.5 10 41.7 22 91.7 12 50.0 23 95.8 12 50.0 　异位内膜 24 21 87.5 8 33.3 22 91.7 5 20.8 21 87.5 10 41.7 22 91.7 13 54.2

　　二、术前雄激素治疗与未治疗的子宫腺肌病患者在位与异位内膜ER、PR比较

　　组1、组2与组3在位内膜与异位内膜ER、PR均阳性，但其阳性率与强阳性率比较，差异均无显著性(P＞0.05)。见表2。

表2　术前未服药与服药患者在位与异位内膜的ER、PR比较(例数)

组

　　别 总

　　例

　　数 在位内膜 异位内膜 ER PR ER PR 阴

　　性 阳性 阳性

　　百分比

　　(%) 强阳性

　　百分比

　　(%) 阴

　　性 阳性 阳性

　　百分比

　　(%) 强阳性

　　百分比

　　(%) 阴

　　性 阳性 阳性

　　百分比

　　(%) 强阳性

　　百分比

　　(%) 阴

　　性 阳性 阳性

　　百分比

　　(%) 强阳性

　　百分比

　　(%) + + + + + + + + + + + + 组1+组2 54 5 9 40 90.7 74.0 7 20 27 87.0 50.0 8 27 19 85.2 35.2 6 36 12 88.9 22.2 组3 24 2 2 20 91.6 83.3 3 11 10 87.5 41.7 3 13 　8 87.5 33.3 2 17 　5 91.6 20.8

　　三、雄激素治疗后不同疗效者的在位与异位内膜ER、PR比较

　　11例疗效好的患者在位内膜PR强阳性率高于13例疗效差的患者，差异有显著性(P＜0.05)；11例疗效好的患者异位内膜ER强阳性率及PR阳性率、强阳性率均高于13例疗效差的患者，差异有显著性或极显著性(P＜0.05、P＜0.01)。见表3。

表3　雄激素治疗疗效好与差的子宫腺肌病患者在位与异位内膜ER、PR比较(例数)

疗

　　效 总

　　例

　　数 在位内膜 异位内膜 ER PR ER PR 阴

　　性 阳性 阳性

　　百分比

　　(%) 强阳性

　　百分比

　　(%) 阴

　　性 阳性 阳性

　　百分比

　　(%) 强阳性

　　百分比

　　(%) 阴

　　性 阳性 阳性

　　百分比

　　(%) 强阳性

　　百分比

　　(%) 阴

　　性 阳性 阳性

　　百分比

　　(%) 强阳性

　　百分比

　　(%) + + + + + + + + + + + + 疗效好 11 0 3 8 100.0 72.7 0 0 11 100.0 100.0 0 0 11 100.0 100.0 0 4 7 100.0 63.6 疗效差 13 2 4 7 　84.6 53.8 2 7 　4 　84.5 　30.8 5 6 　2 　61.5 　15.4 7 4 2 　46.2 15.4

　　讨　论

　　一、EGFR与子宫腺肌病的关系

　　EGFR是一种细胞膜受体，广泛分布于正常子宫内膜组织腺体和上皮中，不随月经周期而改变。异位内膜组织中也有表达［1］。有资料表明，EGFR的生物活性是通过靶细胞上的特异性受体而发挥作用，并且有酪氨酸激酶活性，与表皮生长因子(EGF)结合激活后对各种上皮组织细胞有促进增殖和分泌的效应［2］。因此，EGFR对维持异位子宫内膜的种植及发展有重要意义。近年在荷兰猪胚子宫细胞培养研究中发现，EGF刺激PR表达几乎与雌激素相同，EGF和EGFR在有激素效应的不同组织中，对其组织分化起重要作用，可能对子宫内膜异位症的发病也有一定作用［3］。本研究显示，EGFR在子宫腺肌病患者在位内膜与异位内膜中均有表达，印证了上述实验结果。Prentice等［3］报道子宫内膜异位症患者中仅有50%的异位内膜上皮EGFR阳性，但未提到子宫腺肌病的结果。

　　二、GH与子宫腺肌病的关系

　　GH由垂体嗜酸细胞分泌，是一种蛋白质激素，其化学结构除有分子链长、氨基酸多特点外，还有种系差别大。人GH由191个氨基酸组成，在分子链上有两个双硫链（-S-S-）。GH的功能是刺激所有体细胞的发育和增长，增加体细胞的大小和数量，GH的功能是通过增加细胞结构的大小与细胞核的繁殖而实现的。GH作用于机体后，由机体合成生长素介质，而后发挥作用［4］。

　　通过免疫组化研究发现，人卵巢内有GH，这与卵巢激素合成有关。GH对青春期后卵巢的作用在于：(1)增加了促卵泡激素诱导的孕激素合成；(2)对人卵巢颗粒细胞合成雌二醇有增强作用，其作用对加速青春期卵巢功能的成熟过程有重要意义［5］。GH可刺激人的子宫内膜腺体细胞增生，对子宫腺肌病有促进作用［6］。本研究发现子宫腺肌病时GH在在位与异位内膜中均有表达，证实GH对子宫腺肌病的发生有一定作用。

　　三、子宫腺肌病应用雄激素治疗的意义

　　子宫腺肌病的药物治疗远期效果不够理想。寻求一种新的、疗效好、副作用少的药物是极有意义的。本研究中24例应用雄激素类药物治疗，仅有11例临床症状有缓解，另13例疗效不明显。治疗疗效好的异位内膜ER、PR无阴性，而13例疗效差的有5例和7例为阴性。疗效好的异位内膜ER强阳性率及PR阳性率、强阳性率均高于疗效差的异位内膜(P＜0.05，P＜0.01)。提示，疗效好的异位内膜ER、PR对性激素的敏感性比疗效差的高。与文献报道的子宫内膜异位症中异位内膜对性激素的反应低于在位内膜不一致［7］。然而，目前尚无有关子宫腺肌病的文献报道。

　　研究结果表明，子宫腺肌病是多种因子共同作用的结果。对子宫腺肌病采用单一药物治疗，效果不理想。

　　参考文献

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(收稿：1998-06-12　修回：1999-01-10)