期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆【中图分类号】R446.11【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2009）21-0276-02人类红细胞膜是由脂质双层分子形成其基本结构，蛋白质镶嵌在脂质双层中或衬于其内侧面。由于红细胞膜脂质中脂肪酸不饱和程度高，脂质熔点低于正常体温，使红细胞呈液态，即脂质和蛋白质的分子可以在薄膜样的结构内作侧面移动，从而使膜和血浆中的脂质不断进行交换，以维持膜指质的更新，衬于红细胞脂质双层内侧面和多种蛋白质按一定规律形成柔韧的网络状结构，并与脂质双层密切联系起着支持和稳定脂质双层的作用，维持着血红细胞的表面积，双凹盘形和变形性；还与其他膜蛋白保持红细胞内外阳离子的梯度和水的平衡。当红细胞膜上某种蛋白质的数量或结构发生变化，即可出现形态和功能异常，甚至发生溶血性贫血。如遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症、遗传性口形红细胞增多症都是由于遗传性膜缺陷所致。阵发性睡眠性血红蛋白尿则是后天性获得性红细胞膜缺陷症。1红细胞渗透脆性试验1.1实验原理红细胞在低渗盐中，水分透过细胞膜内渗，使之膨胀破坏而溶血。本试验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水的抵抗力，以鉴别某些与红细胞形态有关的溶血性贫血。红细胞对低渗盐水的抵抗力与其表面和体积的比值有关，厚度越大，该比值越小，即渗透脆性越大；反之，脆性越小。以浓度为横坐标，溶血度为纵坐标绘制曲线，找出50%溶血对应的盐浓度，即红细胞中间脆性（MCF），后者较敏感。1.2试剂171mmol/LNaCl（10g/L）溶液：将100℃烘干的分析纯氯化钠1.0g置于100ml容量瓶虽加少量蒸馏水溶解后，再加蒸馏水至刻度处。1.3操作方法取12支试管，按下表分别加入10g/LNaCl和蒸馏水。然后各管立即加入新鲜静脉血各1滴，并从低浓度到高浓度逐管颠倒混匀，室温静置。1.4结果判断室温下静置2h，观察结果，从高浓度开始，上清液呈透明红色而管底有红细胞者开始溶血管；溶液透明红色，管底完全无红细胞者为完全溶血管。1.5质量控制①NaCl溶液浓度要准确，故应干燥精称。②注射器和试管必须清洁干燥。③应用新鲜静脉血，忌用抗凝血，必要时可用去纤维蛋白血或肝素抗凝血。④结果不易判断时可离心后观察。⑤黄疸患者开始溶血不易观察，严重贫血红细胞太少时均可用等渗盐水将红细胞洗涤后再配成50%红细胞悬液进行试验。⑥每次试验均应做正常对照，与被检血相差0.4g/L，即有临床意义。1.6参考区间①开始溶血：71.8～78.6mmol/L（4.2～4.6g/L）。②完全溶血：47.8～54.7mmol/L（2.8～3.2g/L）。③中间脆性：68.5～76.2mmol/L。1.7临床意义患者比正常对照高6.8mmol/L或中间脆性>76.2mmol/L有诊断价值。①脆性增加见于遗传性球红细胞增多症，也见于自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多者。②脆性降低见于缺铁性贫血，各型地中海贫血，HbC、D、E病，脾切除术及阻塞性黄疸等。2酸溶血试验2.1实验原理正常人红细胞在酸化（pH6.6～6.8）的自身新鲜血清中（内含补体和备解素），经37℃孵育1h不溶血。而阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）患者，因红细胞膜缺陷，对补体溶血效应敏感性增强，则发生溶血。2.2试剂①0.2mol/LHCL。②8.5g/LNaCl溶液。2.3操作方法①配制50%红细胞悬液取10ml离心管2支，标明患者、对照，均加入8.5g/LNaCl溶液5～6ml，分别加入患者和对照者末梢血十几滴，混匀，离心后弃去上清，如此重复洗涤红细胞2次，最后配成50%红细胞悬液备用。②分离正常对照血清取与患者同型或AB型血3～5ml，待自然凝固后分离血清。2.4结果判断试验管溶血，对照管不溶血为阳性；试验管和对照管均不溶血为阴性。2.5质量控制①血清酸化后试管必须塞紧，否则CO2逸出使血清酸度降低。②抗凝剂中的Na+、K+可影响pH，故不宜用抗凝血，但可用脱纤维蛋白血。③为保证补体充足，最好用混合血清，但正常对照红细胞必须用“O”型血。④多次输血者，可因血中异常红细胞相对减少，本试验可能性呈弱阳性或阴性。2.6临床意义正常为阴性，阳性见于PNH。遗传性球红细胞增多症及自身免疫性溶血性贫血也可呈阳性。主要与红细胞球形化有关。血清加热破坏补体，若本试验转为阴性则更支持PNH。3蔗糖溶血试验3.1实验原理低离子强度的等渗蔗糖溶液，在温育条件下可促进补体与红细胞膜的结合，使红细胞对补体损伤的敏感性增强而导致溶血。3.2试剂92.4g/L蔗糖溶液。3.3操作方法取新鲜抗凝血（枸橼酸盐或草酸盐抗凝）0.5ml加入4.5ml蔗糖溶液中，混合，置于37℃孵育箱内30min后离心，上清液呈红色为阳性，无色为阴性。3.4质量控制注射器、试管应清洁干燥，避免溶血。无蔗糖可用10%葡萄糖代替。3.5临床意义正常为阴性。阳性见于PNH。本试验较Ham试验敏感，是PNH诊断的筛选试验，但特异性较差。再生障碍性贫血-PNH综合征、巨幼红细胞性贫血、自身免疫性溶血性贫血也可呈阳性。本试验最好与Ham试验同时操作，用正常血清代替患者血清做试验，可除外患者补体异常所致的假阴性。4热溶血试验4.1实验原理利用患者的红细胞和自身新鲜血清（含补体），经37℃孵育后，由于葡萄糖分解产酸，使有内在缺陷的红细胞溶解而溶血。4.2操作方法抽取静脉血1～2ml，取下针头，沿管壁缓缓注入小试管内，避免产生气泡，置37℃孵育箱保温24h，取出后离心。上清呈红色（溶血）为阳性。4.3质量控制注射器要干燥，小试管要清洁，操作过程中避免溶血，防止出现假阳性。孵育24h血块未回缩者，可用小玻棒沿管壁轻轻分离，然后离心，观察结果。4.4临床意义正常为阴性。阳性见于PNH，其他溶血性贫血亦呈阳性，但阳性率比PNH为低。本试验用于PNH的筛选。